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核酸纯化的方法及原理
2022-08-19 核酸抽提与纯化是分子生物学试验的基础，核酸纯化方法是影响提取核酸质量高低的最重要因素，也是下游分子生物学试验成败的关键。核酸纯化的方法及原理如下：一、PC抽提法PC抽提是去除蛋白质有效的手段，但超过了该饱和度，裂解体系中的蛋白质不会被一次去除，必须靠多次抽提，方可*去除。且每次抽提都会损失部分核酸。另外，体系太粘稠的坏处是，蛋白质难以*去除，以及基因组DNA会断裂得更厉害，所以要注意裂解液与样品的比例。PC抽提的另外一个用途是，利用酸性酚可以部分去除DNA的特点，在RNA抽提...
化学发光免疫分析包含免疫分析系统和化学发光分析系统
2022-07-22 在常温下由化学反应产生的光，产生电子能级处于激发态的物质，后者通过跃迁释放能量产生光子，从而导至的发光现象。化学发光是一个多步骤的过程。学发光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)诞生于1977年，是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析，将高灵敏的化学发光技术与高特异性的免疫反应结合起来建立的微量测定技术，因此该技术灵敏度高、线性范围宽、应用范围广。而且CLIA与放射免疫分析(RIA)、荧光免疫分析(IFA)及酶免疫分析(...
PCR原理及反应步骤
2022-07-21 PCR的原理：多聚酶链式反应(polymerasechainreaction)简称PCR技术，是近30多年发展起来的一种体外扩增特异性DNA片段的技术，可在数小时之内对仅有几个拷贝的基因放大千万倍。那么，PCR的原理是怎样的呢？PCR技术实际上是在模板DNA、引物以及原料(四种脱氧核糖核苷酸)在适宜的反应条件下，通过DNA聚合酶的酶促反应完成DNA扩增的过程。PCR技术的特异性取决于引物和模板DNA结合的特异性。PCR反应分为三步：1)变性：通过加热时DNA双螺旋的氢键断裂，...
影响重组肠激酶活性的因素有哪些
2022-07-20 肠激酶(Enterokinase，EK，EC3.4.21.9)是一种异源二聚体形式存在于哺乳动物十二指肠内的丝氨酸蛋白酶。它能高效专一性的水解工程菌表达的融合蛋白（识别位点是Asp-Asp-Asp-Asp-Lys）释放出目的蛋白，被广泛用于生物工程制药的开发。牛肠激酶由一条结构亚基（重链）和一条催化亚基（轻链）构成，二者以二硫键结合。据报道，重组肠激酶轻链体外具有全酶的酶切特异性，同时对基因工程融合蛋白底物的酶切活性较提纯的牛肠激酶明显增强。天然肠激酶来源有限，且从动物组织提...
一图读懂细胞转染那些事-part1
2022-06-30 简析各类细胞转染方法细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。定义随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。下文中将从多个维度，介绍细胞转染的各类小知识。一、瞬时转染与稳定转染哺乳动物细胞表达系统能促使在其内表达的蛋⽩正确折叠并进行复杂修饰，表达的蛋⽩更接近真实自然状态，便于模拟真实细胞内环境，进行蛋白功能研究。把目的基因转入哺乳动物细胞，表达⽣产蛋⽩通常有两种⽅式：瞬时转染与稳定转染（构建稳定细胞系），如图...
RNA提取方法总结
2022-06-22 这篇文章主要讲的是几种常用的RNA提取方法。1、异硫氰酸胍氯化铯超速离心法原理：使用蛋白质变性剂异硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，经过起始密度为1.78g/ml的氯化铯介质，进行密度梯度超速离心，RNA沉淀于管底，而DNA与蛋白质在上清中。使用这种方法，不但能得到高质量的RNA，而且能同时分离出细胞染色体DNA.本法对于冷冻时间长、细胞质和细胞核不易分离的组织标本以及富含RNA酶的组织细胞(如胰腺)的RNA提取尤其适合。此法提取的RNA的质量好和成功率高，已成为提取哺乳动物细...
如何选择核酸染料
2022-05-27 科研人员还在为如何选择核酸染料而烦恼吗？带您认识几款优秀的核酸染料一、李记GelRed,李记GelGreen——李记生物研发的两款核酸染料。据不*统计，有强烈致癌、致畸作用的EB染料仍以90%的优势占据核酸染料使用量多，在众多的EB替代染料中，名气最大的要数Life公司的SYBR系列、美国Biotium公司的GelRed,GelReen染料，其他替代染料要么是EB,吖啶橙改名，要么是国内不成熟的仿品，安全性毫无保障。Life公司的SYBRGreen,SYBRGoad,SYBR...
细胞增殖及细胞活力检测方法
2022-05-25 一、细胞增殖与细胞活性细胞增殖是活细胞的重要⽣理功能之⼀，细胞增殖与细胞活性检测所用的方法相近，但实验目的不同。细胞增殖是通过细胞增殖的物质基础判断细胞的数量变化，例如细胞计数法，反应的就是细胞真实的数量。而细胞活性检测，则是通过检测细胞受到药物或其他措施处理后，标志物产量或浓度的变化，进而判断药物或处理措施的作用，细胞活性检测所得结论，往往反映了实验设计的目的。细胞增殖检测，因检测标志物的不同，目前大致分为四类：DNA合成检测、代谢活性检测、细胞增殖相关抗原检测和ATP浓度...

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